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在使用高效液相色譜系統進行日常分析檢測的過程中，有時會遇到色譜峰峰面積重現性差的問題，導致無法對組分進行準確定量。出峰面積重現性差的話，首先要看保留時間是否穩定。如果保留時間都不穩定，那也不用說出峰面積的穩定了。而保留時間的穩定性，跟系統的壓力、流動相比例、流動相的脫氣以及色譜柱都有關系。導致色譜峰峰面積重現性差的常見原因及解決方法：1、檢查進樣量及進樣操作進樣量不符合要求或者進樣時操作失誤，都可能導致色譜峰面積重現性差。如果是使用手動進樣器且方法要求進樣量小于定量環體積，必...

液相色譜柱的損壞70-80%都是由于柱壓升高導致的，色譜柱使用了一段時間以后，壓力會有所升高，達到一定程度以后色譜柱就會報廢，如果在一天之內壓力升高了2-5個mpa，或者在幾次使用后壓力就翻倍的升高，這些都是異常狀況，那建議進行排除。一、色譜柱保存不當原因：色譜柱如較長時間不用，重新啟用后需按說明書的活化方法重新活化后再使用，否則也會出現柱壓升高，柱效下降。解決辦法：按說明書重新活化色譜柱。原因：除另有規定外，一般反相色譜柱都需保存在高比例有機相中，以防止微生物滋生。否則，重...

標準曲線法，分為外標法和內標法。外標法在液相色譜中用的較多。內標法準確但是麻煩，在標準方法中用的較多。1、外標法用被測化合物的純品作為標準樣品，配制成一系列的已知濃度的標樣。注入色譜柱的到其響應值（峰面積）。在一定范圍內，標樣的濃度與響應值之間存在較好的線性關系，即W=f×A，制成標準曲線。在*相同的實驗條件下，注入未知樣品，得到欲測組分的響應值。根據已知的系數f，即可求出欲測組分的濃度。外標法的優點：操作、計算簡單，是一種常用的定量方法；無需各組分都被檢出、洗脫；需要標樣；...

紫外檢測器的使用覆蓋面達到HPLC檢測器的75%，在各個領域得到了廣泛的應用，特別是在藥品、環保、生命科學、糧食科學、農業科學、食品科學、醫療衛生等領域，應用更加廣泛。國際上生產HPLC的廠商很多，無一不帶紫外檢測器。中國也有10幾家生產HPLC的企業。基本上都帶紫外檢測器。有的HPLC只有紫外檢測器一種，而無其它類型的檢測器。紫外檢測器不僅靈敏度高、噪音低、線性范圍寬、有較好的選擇性，而且對環境溫度、流動相組成變化和流速波動不太敏感，因此既可用于等度洗脫，也可用于梯度洗脫。...

C18色譜柱因鍵合方式的不同、粒徑的不同、長度的不同，內徑的差異等多方面因素，呈現出不同選擇性。這樣，在市場上就出現了數百種具有不同分離選擇特性的C18色譜柱。對于傳統的C18色譜柱，pH值使用范圍通常為2～7，因為pH值高于8時C18固定相會受到限制。由于殘余硅羥基的存在，易對堿性化合物造成不可逆吸附，造成峰拖尾，影響分離與分析。pH值太低則會使鍵合的烷基脫落，而且對成分的分離達不到要求。1、酸性條件下C18的選擇為了改善C18色譜柱在低pH值時的穩定性，有人提出了空間位阻...

紫外檢測器（ultraviolet－visibledetector，UVD）是HPLC中應用廣泛的檢測器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測器。其特點是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對強吸收物質檢測限可達1ng，檢測后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測器串聯使用。紫外檢測器主要由光源、分光系統、檢測池和檢測系統四大部分組成，從光源分光系統得到的特定波長的單色光通過檢測池時，一部分光被溶液中的吸光性溶質吸收，剩余的透射光到達檢測系統后光信號轉換成電信號...

色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環)、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。只有了解影響色譜柱性能的因素，才能結合目標分析物的性質、需要達到的分析效果及實驗室條件來選擇適合的色譜柱。(1)硅膠純度硅膠純度和殘留金屬離子濃度，硅膠的雜質會影響化合物的峰形，硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形，易發生拖尾。(2)色譜柱尺寸填料床的長度和內徑，增加色譜柱長度，可以在一定程度上提高柱效，但也會升高壓力和導致峰展寬；寬柱徑，提高載樣量，但也會增加橫向擴散，同樣會導致峰展寬。窄柱徑可以節約...

液相色譜檢測器是HPLC儀的三大關鍵部件之一。檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉化為可供檢測的信號。HPLC的檢測器要求靈敏度高、噪音低（即對溫度、流量等外界變化不敏感）、線性范圍寬、重復性好和適用范圍廣。1、按原理可分為光學檢測器（如紫外、熒光、示差折光、蒸發光散射）、熱學檢測器（如吸附熱）、電化學檢測器（如極譜、庫侖、安培）、電學檢測器（電導、介電常數、壓電石英頻率）、放射性檢測器（閃爍計數、電子捕獲、氦離子化）以及氫火焰離子化檢測器。2、按測量性質可分為通...